Hreyfanlegur fasi er jafngildur fljótandi fasi blóðs, og það er ýmislegt sem þarf að huga að við notkun. Meðal þeirra eru nokkrar „gildrur“ sem þarf að huga að.
01. Mældu sýrustig farsímafasans eftir að lífrænum leysi hefur verið bætt við
Ef þú mælir pH með lífrænu aukefni verður pH sem þú færð öðruvísi en áður en lífræna leysinum er bætt við. Hins vegar er mikilvægast að vera samkvæmur. Ef þú mælir alltaf pH eftir að lífræna leysinum hefur verið bætt við, vertu viss um að tilgreina skrefin þín í aðferðinni sem þú notar svo aðrir fylgi sömu aðferð. Þessi aðferð er ekki 100% nákvæm, en að minnsta kosti mun hún halda aðferðinni stöðugri. Þetta gæti verið mikilvægara en að fá nákvæmt pH-gildi.
02. Enginn biðminni notaður
Tilgangur stuðpúða er að stjórna pH og koma í veg fyrir að það breytist. Margar aðrar aðferðir breyta sýrustigi farsímafasans, sem getur valdið breytingum á varðveislutíma, hámarksformi og hámarkssvörun.
Maurasýra, TFA o.s.frv. eru ekki stuðpúðar
03. Ekki nota jafnalausn innan eðlilegs pH-marks
Hver stuðpúði hefur 2 pH eininga sviðsbreidd, þar sem hann veitir besta pH stöðugleikann. Buffer utan þessa glugga mun ekki veita virka viðnám gegn pH breytingum. Notaðu annaðhvort stuðpúða á réttu bili, eða veldu stuðpúða sem nær yfir pH-sviðið sem þú þarft.
04. Bætið jafnalausn við lífræna lausn
Ef jafnalausn er blandað saman við lífrænan fasa mun það líklegast valda því að biðminni fellur út. Í mörgum tilfellum, jafnvel þótt úrkoma hafi fallið, er enn erfitt að greina hana. Mundu að bæta lífrænu lausninni alltaf við vatnsfasann, sem getur dregið verulega úr líkum á útfellingu stuðpúða.
05. Blandið styrkleikastiglinum frá 0% með dælu
Dælur sem eru fáanlegar í dag geta í raun blandað saman hreyfanlegum fasa og afgasað í línu, en ekki allir sem nota aðferðina þína munu hafa hágæða dælu. Blandið A og B saman í eina lausn og keyrið hana 100% í línu.
Til dæmis er hægt að búa til 950 ml af lífrænni upphafsblöndu með því að blanda saman við 50 ml af vatni. Kosturinn við þetta er að það getur dregið úr breytileika milli HPLC og dregið úr möguleikanum á loftbólum og úrkomu í kerfinu. Rétt er að taka fram að hlutfall dælublöndunnar er 95:5, sem þýðir ekki að forblandinn varðveislutími í flöskunni sé einnig 95:5.
06. Ekki nota rétta breytta sýru (basa) til að skipta um stuðpúða
Notaðu aðeins sýruna eða basann sem myndar buffersaltið sem þú notar. Til dæmis ætti að útbúa natríumfosfatbuffa með aðeins fosfórsýru eða natríumhýdroxíði.
07. Ekki tilgreina allar upplýsingar um biðminni í aðferðinni, svo sem að bæta við 5g afnatríumfosfat í 1000ml af vatni.
Tegund jafnalausnar ákvarðar pH-sviðið sem hægt er að jafna. Nauðsynlegur styrkur ákvarðar stuðpúðastyrkinn. 5 grömm eða vatnsfrítt natríumfosfat og 5 grömm af mónónatríumfosfat einhýdrati hafa mismunandi styrkleika stuðpúða.
08. Bæta við lífrænum leysiefnum áður en athugað er
Ef fyrri aðferðin notaði stuðpúðalausn fyrir grunnlínu B, og aðferðin þín notar lífræna lausn fyrir grunnlínu B, geturðu vonandi sett stuðpúðann í dæluslönguna og dæluhausinn.
09. Lyftu flöskunni og tæmdu síðasta dropann
Það eru góðar líkur á því að þú hafir ekki nægan farsímafasa til að klára alla keyrsluna og sýnishornið þitt mun reykja. Fyrir utan möguleikann á að brenna út dælukerfið og súluna mun hreyfanlegur fasinn gufa upp alveg og hreyfanlegur fasinn efst á flöskunni mun breytast.
10. Notaðu ultrasonic afgasun farsímafasa
Mikilvægasti punkturinn er að ganga úr skugga um að öll stuðpúðarsöltin séu leyst upp, en þetta er versta leiðin til að afgasa og mun fljótt hita upp hreyfanlega fasann, sem veldur því að lífrænu efnisþættirnir gufa upp. Til að spara óþarfa vandræði síðar skaltu taka fimm mínútur til að ryksuga farsímafasinn þinn.
Birtingartími: 27. ágúst 2024